5使用前檢查bufferbl是否有沉澱析出,若出現沉澱,請於70c溫浴加熱至沉澱完全溶解後再使用。
完成試劑準備工作之後,在鐘教授的首肯之下,研究員開始進行dna的提取。
具體操作步驟如下
1向96圓孔板的每孔中加入101novel.comul蛋白酶k。
2加101novel.com0ul抗凝全血到96圓孔板中。
~undefed若全血樣品體積少於101novel.com0ul,用pbs補充到101novel.com0ul。
~undefed若樣品為鳥類血,樣品用量須低於10ul。
~undefed若需得到rnafree的基因組dna,在步驟3加入bufferbl前加入dnasefree的rnasea101novel.coml。
3加101novel.com0ulbufferbl,注意不要打濕每孔的邊緣,用96圓孔矽膠片密封各孔。
4用力混合30s。
53000rp簡短離心使96圓孔矽膠片上的溶液到96圓孔板內。啟動離心機,當速度達到3000rp後即停止。
6在培養箱或烘箱中70c溫浴至少10。
73000rp簡短離心使96圓孔矽膠片上的溶液到96圓孔板內。啟動離心機,當速度達到3000rp後即停止。
8取下96圓孔矽膠片,每孔加入101novel.com0ul乙醇(96100)。
9用96圓孔矽膠片密封各孔,用力混勻混合15s。3000rp簡短離心使96圓孔矽膠片上的溶液到圓孔板內。啟動離心機,當速度達到3000rp後即停止。
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10將96孔dna板放到一潔淨的96孔16l深孔板。取下圓孔板上的96圓孔矽膠片,將每孔中的溶液轉移至96孔dna板中,6000rp離心4。
11丟棄96孔16l深孔板的濾液,將96孔dna板放回到96孔16l深孔板上,每孔加入500ulbuffer1b,用一新的bf400膜密封96孔dna板,6000rp離心4。
~undefed確認在buffer1bncentrate中已按試劑瓶上的指定體積加入無水乙醇。
12丟棄96孔16l深孔板的濾液,將96孔dna板放回到96孔16l深孔板上,每孔加入850ulbuffer2,用另一新的bf400膜密封96孔dna板,6000rp離心4。
~undefed確認在buffer2ncentrate中已按試劑瓶上的指定體積加入無水乙醇。
13棄濾液,將96孔dna板放回到96孔16l深孔板上,每孔加入400ulbuffer2,用另一新的bf400膜密封96孔dna板,6000rp離心4。
14將96孔dna板放在一潔淨的96孔16l深孔板上,用bf400膜密封96孔dna板,6000rp離心15。
15將96孔dna板放在另一潔淨的96孔16l深孔板上,每孔加入100101novel.com0uleentb或去離子水,室溫靜置2,用另一新的bf400膜密封96孔dna板,6000rp離心4洗脫得到dna。
看著最終提取出來的dna樣本,鐘教授終於露出了滿意的微笑
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